直接影响到pcr检测实验结果的因素,通常有以下几种:
引物与模板DNA互补的程度、 酶的浓度、镁离子浓度、dNTP的质量与浓度。
还有循环次数、温度和时间的设置,pcr实验设备与配套耗材等
在众多影响因素中,pcr实验耗材也是影响pcr检测实验结果的重要因素。
用于pcr检测的耗材类型包括:8连管、pcr管、无裙边、半裙边,全裙边,深孔板孔等。这么多的耗材该如何选择呢?
pcr耗材多数属于PP材质,由于这种材质不仅有良好的化学耐性而且表面不易粘附生物分子,可耐120°C的高温。我们常见的pcr耗材规格及体积如下:
单管/联管:0.5mL,0.2mL, 0.15mL 96孔板:0.2mL, 0.15mL
384孔板:0.04mL 。
当样品量比较少的时候,可选用单管或8排管。
Pcr管多数是透明的,但Qpcr实验中建议选用白色pcr耗材,这种材质的耗材可良好地反射荧光信号,优化实时荧光定量pcr检测的结果。
在pcr板中无裙边板适用于大多数的PCR实验,但其移液过程中稳定性较差不太适用于自动化的PCR仪。
半裙边板的移液稳定性相对较高比较适合自动化的应用。
全裙边板的移液稳定性好,机械强度较好,比较适用于凸模pcr仪和自动PCR系统。
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