生物样本是医学研究的重要资源,其质量在很大程度上决定着临床结果的准确性和可靠性。目前生物样本及其提取产物主要有深低温和常温两大类保存方式,针对不同科研的需求,更多的样本保存方式也相继问世,本文将对常用的样本保存方式及运输条件进行小结,可以收藏保存备用。
样本储存条件
1. -196℃、-150℃ 深低温冻存
超低温冻存是理想的样本保存方法,目前液氮(-196℃)是靠谱的样本保存方法,然而由于样本浸没在液氮中,游离的组织碎片可能带来交叉污染的潜在风险,因此催生了气相液氮(-150℃)的保存方式,就是将样本置于液氮以上、气相液氮的包围之中,可以很好地避免交叉污染的风险。另外,也可以通过电力冰箱制冷达到-150℃的低温效果,从而能满足样本的长期保存需求。因为-137℃是水玻璃化温度,低于此温度时细胞内能导致内容物降解的一切生化反应均处于失活状态,从而能达到长期保存的要求。
2. -80℃
-80度低温保存是冻存核酸较为理想的样本保存方法:在不具有液氮保存条件的生物样本库,也可以考虑使用-80℃深低温冰箱来保存组织样本。有研究表明,在-80℃条件下,DNA产量、完整性以及RNA产量可以维持长达7年不发生明显改变,但是RNA完整性在冻存5年后开始下降。因此建议保存组织时候进行分装,再加入RNA特异性稳定剂后冻存于-80℃,更有利于组织内RNA的保存。
关于蛋白质的保存,目前也以深低温冻存为主,可以很好地保护其稳定性。短期储存也可以保存在-20°C的低温冰箱中。
3. 常温保存:鉴于深低温冻存的运输与操作的不便性,常温保存的方法应运而生。常温保存技术的原理可类比线虫的脱水休眠现象,利用某些特殊技术或容器将脱水干燥后的样本置于密闭环境中,或者向生物样本中添加保护剂,使相关酶失活,从而达到常温环境下保护样本的目的。
样本的运输条件01 全血/血浆/血清/干血片DNA: 24h内可室温运送至实验室,72h内运输至实验室置于2-8℃条件,72h及更长时间的运输需要在-20℃条件下。RNA:4h内分离血浆,5天内能够运输至实验室可保存在2-8℃,5天及更长时间运输时需在-20℃条件下。干血片可在室温下运输。02 肺泡灌洗液24h内可室温运输至实验室,72h内需在2-8℃冷藏运输,72h及更长时间运输需采用-70℃或为更严格的条件。03骨髓骨髓标本应在2-8℃条件下运输,如果用于RNA分析,应该添加RNA稳定剂。04 口颊细胞室温条件下,核酸可稳定存在1周,可室温运输,检测RNA,需放置在RNA稳定剂中。05 淋巴细胞层从血液里分离的淋巴细胞,需在2-8℃冷藏运输,无法及时提取时应放置-70℃以下储存。06 脑脊液DNA病毒检测: 需在2-8摄氏度条件下运输,应该保存在-20℃或-70℃或者更低温度条件下。RNA分析:立即置于冰上降温,并置于干冰上运输至实验室。07 细针抽取物 DNA病毒检测: 需在2-8℃条件下运输,应该保存在-20℃或-70℃或者更低温度条件下。RNA分析:立即置于冰上降温或置于RNA稳定剂中进行运输。08 组织DNA分析:新鲜组织应该立即置于-20℃,并保持在冰上运输保存。RNA分析:新鲜组织采集后立即采用液氮速冻,进行运输保存。石蜡包埋组织可室温运输保存。09 痰液 30min内可在室温下运输至实验室,否则应在4-8℃条件下运送010 粪便可借助粪便收集盒及粪便采集管进行采集,黄豆粒大小样本即可。4h内进行核酸提取或-80℃低温保存。011 宫颈和尿道拭子在检测试剂厂家推荐的运送培养基中运输。012 植物组织样本采集体态正常的新鲜样本放入样本袋中做好标记;样本若有泥土一般需要洗涤,之后对其进行干燥并尽快进行核酸提取;常温或者-20℃进行运输保存。 这里需要注意的是样本储存在稳定的条件下,应避免反复冻融。
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