荧光定量PCR仪是一种利用荧光信号实时监测聚合酶链式反应(PCR)进程,并通过标准曲线对未知模板进行定量分析的仪器。该技术以其高灵敏度、高特异性及广泛的应用领域,成为了分子生物学研究中不可缺工具。
荧光标记方法:在PCR体系中加入荧光基团,如SYBR Green I染料或特定的荧光探针(如TaqMan探针),通过荧光信号的变化来实时监测PCR扩增过程。
Ct值计算:每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数称为Ct值。Ct值与起始模板拷贝数的对数呈线性关系,因此可以用来定量分析。
定量原理:通过已知起始拷贝数的标准品制作标准曲线,未知样品的起始拷贝数可以通过其Ct值从标准曲线中计算得出。
荧光定量PCR仪应用领域:
基因表达研究:比较不同处理样本或不同时间点特定基因的表达差异,广泛应用于生物医学研究。
病原体检测:用于检测和定量分析病原微生物或病毒含量,如新冠病毒检测等。
遗传疾病诊断:通过检测特定的基因突变或染色体异常,辅助遗传性疾病的诊断和产前诊断。
药物开发:在新药研发过程中,用于验证药物靶点的有效性及药物作用机制的研究。
环境监测:检测环境样本中的微生物污染程度或特定污染物的基因标志物。