琼脂糖凝胶过滤基质树脂填料 Smartaroe 蛋白纯化
Smartarose是一种球形琼脂糖凝胶过滤基质，Smartarose 4B和Smartarose 6B的琼脂糖含量分别为4%和6%o Smartarose CL凝胶是 Smartarose 4B和Smartarose 6B的衍生物，化学和物理性能更优异，流速更快。Smartarose CL凝胶耐有机溶剂，因此适合在有机溶剂 中分离物质。Smartarose和Smartarose CL分离范围较广，适合对分子量不同的样品进行表征或分离。
琼脂糖凝胶过滤基质树脂填料 Smartaroe 蛋白纯化性能
项目 | 性能 |
Smartarose 琼脂糖 最佳分离范围 粒径 推荐线性流速* (cm/h) pH稳定性** | 4B 6B CL-4B CL-6B 4% 6% 4% 6% 70x103-20x106 1Qx103 -4x106 70x103-20x106 10x10 3-4x106 45-165 pm 11 cm/h 14 cm/h 26 cm/h 30 cm/h 4-9 4-9 3-13 3-13 耐受凝胶层析常用溶液，如8 M尿素、6 M 盐酸 |
试剂耐受 | 耐受凝胶层析常用溶液，如8 M尿素、6M盐酸 Mo也耐受乙醇、DMF、THE、 丙酮、DMS、弧。 氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、卩比卩定、磷酸三乙 酯和乙月青等有机溶剂。 |
物理性能 灭菌 | pH或离子强度变化引起的体积变化可以忽略不计 化学方法 水蒸气高压灭菌，120°C, 20 min |
pH范围是我们根据实验和经验估算的。请注意：pH长期稳定性是指凝胶在长时间内其层析性能不会改变的pH范围。pH短期稳定性是指凝胶再生和清洗时稳定的pH范围。
装柱说明：
介质保存于20%乙醇。装柱前建议将20%乙醇抽滤去除，置换成去离子水。
将75%介质和25%去离子水混句，真空负压脱气。不要使用粘性试剂装柱。装柱完成后，可以用粘性缓冲液低流速平衡层析柱。
2.2介质装填
装柱方法有两步，第二步应在恒压下进行，柱压见表2。凝胶层析的分辨率随柱床高度的增加而增加。因此，柱床高度最好在60 cm以上。
表2.推荐装柱流速和压力
介质 | 步骤1 流速(cm/h) | 步骤2 压力(MPa.bar.Psi) |
Smartarose 4B | 15 | 0.018,0.18,2.6 |
Smartarose 6B | 30 | 0.025,0.25,3.6 |
Smartarose CL-4B | 30 | 0.025,0.25,3.6 |
Smartarose CL-6B | 30 | 0.045,0.45,6.4 |
层析柱的装填(使用储液器装填) 装柱前根据层析柱直径计算柱子底面积，根据所需装柱高度计算所需介质体积，公式如下： V = 1.157ir2h | ||
V：所需介质体积ml
1.15：压缩系数（不同介质压缩系数不同）
r：柱管半径cm
h：装填高度cm
1） 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去离子水。
2） 将填料悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3） 如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
4） 打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液 压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得到 一个很好的装填效果。（注意：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%）当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上2 倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
5） 关闭泵，关闭层析柱出口。
6） 如果使用储液器，去除储液器，将分配器置于层析柱中。
7） 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
8） 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
2.3柱效测试
为了检验层析柱的质量，应进行柱效测试，以确定理论塔板数和峰不对称系数。
洗脱液：去离子水
样品：2% （v/v）丙酮水溶液或者1 M NaCI溶液
如图1所示计算理论塔板数，用如下公式：N/m = 5.54 （VrM）2 x 1000/L
计算峰不对称系数（AS）公式如下：AS = b/a （如图1所示）
3 .纯化流程
3.1缓冲液的准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 pm或0.45 pm滤膜过滤。
平衡液为蛋白纯化后，用于保护蛋白的溶液，根据客户需求自行选择。
3.2样品准备
样品在上样前建议离心或用0.22 pm或0.45|jm滤膜过滤，减少杂质，防止堵塞柱子。
3.3样品纯化
1） 平衡
上样之前，用平衡液至少平衡两个柱体积，或直到基线稳定。含去垢剂的溶液可能需要平衡更长时间。
2） 上样
推荐上样体积为柱体积的2-5%o可以通过上样管或样品环来上样。纯化流速最高不能超过装柱流速的70%0
3） 再生
再生通常用水冲洗2倍柱体积，然后用缓冲液冲洗2-3倍柱体积，如果不立刻使用，则用20%乙醇平衡后，4-30°C保存。对不同的样品, 建议大约5次循环后，采用完整的在位清洗（CIP）o
4.清洗及保存
4.1 CIP （Cleaning In Place）清洗
CIP是去除以前生产过程中产生的结合过紧密、沉淀或变性的物质。在某些情况下，介质再生后，月謳或变性蛋白跡物质仍可育诫留茁扫=o 需要制鵰料中已知污染I刎楼来设H特定的CIP程序。
当出现下列情况，需要对介质进行在位清洗：
•柱压增高；
•填料颜色变化明显；
•分辨率降低；
•上接头与凝胶表面之间出现空隙；
•如果反压增高，在介质清洗前检查阀门、管线等中止情况。
1） 去除非特异性结合蛋白和脂蛋白
用0.5 M NaOH清洗一个柱体积，去离子水或缓冲液平衡至中性，流速40 cm/ho
2） 去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法
用4倍柱体积的1.0-2.0 M NaOH溶液，流速40 cm/h对介质进行清洗，然后立即用2-3倍柱体积的水清洗。
3） 去除一些强结合的疏水蛋白
用4-10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗（使用有机溶剂要梯度清洗，避免起泡）或者用含去垢剂的酸或中性溶液。比如，用1 M 醋酸溶液含0.5%非离子型去垢剂，清洗流速40 cm/h。随后用70%乙醇冲洗5个柱体积洗去残留去垢剂。
4.2保存
CIP之后的介质如果不使用可以用20%乙醇，4 -30°C保存。
5 .订购信息及相关产品
产品名称 | 货号 | 规格 |
SEC0060 | 25 ml | |
SEC0061 | 100 ml | |
Smartarose 4B | SEC0062 | 500 ml |
SEC0063 | 1 L | |
SEC0064 | 10 L | |
SEC0070 | 25 ml | |
SEC0071 | 100 ml | |
Smartarose 6B | SEC0072 | 500 ml |
SEC0073 | 1 L | |
SEC0074 | 10L | |
SEC0080 | 25 ml | |
SEC0081 | 100 ml | |
Smartarose CL-4B | SEC0082 | 500 ml |
SEC0083 | 1 L | |
SEC0084 | 10L | |
SEC0090 | 25 ml | |
SEC0091 | 100 ml | |
Smartarose CL-6B | SEC0092 | 500 ml |
SEC0093 | 1 L | |
SEC0094 | 10 L |
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