天根试剂快速质粒小提试剂盒

天根试剂快速质粒小提试剂盒 DP105

产品简介

天根试剂-快速质粒小提试剂盒-DP105采用硅胶膜吸附技术，结合质粒DNA，操作简单、快速。每次处理1-4 ml 过夜培养的细菌培养液，仅需 8 min 即可提取多至24 μg 的质粒DNA。使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、 文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

天根试剂快速质粒小提试剂盒 DP105 特点

■ 快速：步骤少，操作简单，仅需8 min。

■ 高效：可提取菌体85% 以上质粒DNA。

■ 配备了TIANRed 试剂，可以清晰辨明抽提过程中样本的裂

解程度，确保得到高效率、高纯度的质粒DNA。

提取得率

快速质粒提取试剂盒颜色变化

天根试剂快速质粒小提试剂盒 DP105

使用注意事项

 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 

1．溶液P1在使用前先加入RNase A和TIANRed（将试剂盒中提供的RNase A和TIANRed全 部加入），混匀，置于2-8℃保存。 2．使用前请先检查溶液P2和P5是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。 

3．注意不要直接接触溶液P2和P5，使用后应立即盖紧盖子。 

4．所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12,000 rpm (~13,400×g )。

5．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。

 6． TIANRed的使用方法： TIANRed是一种指示剂，用以指示整个操作的正确性，对人体无 害。使用时按照TIANRed:溶液P1=1:200进行混合，颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清 的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色；添加溶液P2之后混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色，则说明充 分裂解；再添加溶液P5至混匀后，溶液为澄清的黄色，说明中和复性充分。 

实验操作步骤说明：

 使用前请先在漂洗液PWT中加入CH2O6，加入体积请参照瓶上的标签。

 1. 取1-4 ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集 到一个离心管中）。

 2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入150 μl溶液P1（请先检查是否已加入RNase A和 TIANRed），使用移液器或涡旋振荡器悬浮细菌沉淀。 注意：如果有未混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 

TIANRed试剂的加入对于后续PCR、酶切和测序都没有影响。使用时按照TIANRed:溶液 P1=1:200进行混合，颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入 到收集好的菌体中混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色。 

3. 向离心管中加入150 μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。 注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，如果 未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不，应减少菌体量。 由于使用了TIANRed，添加溶液P2混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色。如果在紫色中 混杂有浑浊的红色，则说明裂解不充分，继续混匀直至溶液颜色变为澄清的紫色。 

4. 向离心管中加入350 μl溶液P5，立即快速地上下颠倒混匀12-20次，混匀，此时将出 现絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min。

 注意：加入溶液P5后应立即混合，应快速上下颠倒混匀，避免产生局部沉淀。上清中含 有少量微小白色沉淀对后续实验没有任何影响。如果上清中存在大量微小白色沉淀，可 再次离心后取上清。由于使用了TIANRed，添加溶液P5混匀后，溶液为澄清的黄 色，如果在黄色中混有紫色，则说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色变为澄清的 黄色。 

5. 将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CP3放入收集管中。

6. 向吸附柱CP3中加入300 μl漂洗液PWT，12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。 

7. 将吸附柱CP3放入收集管中, 12,000 rpm (~13,400×g) 离心1 min，目的是将吸附柱中残 余的漂洗液去除。

8. 将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液 TB，12, 000 rpm (~13,400×g) 离心30 sec将质粒溶液收集到离心管中。 

注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响。